外周血单个核细胞分离及冷冻保存
时间:2019-08-12 10:07来源: 作者:ydgmve2020yyx 点击:
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细胞分离： 外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml，平均分至50ml离心管中，931g，离心8min，吸取上层血浆至50ml离心管中，取1.5ml于EP管中，标记，－80℃保存。用NA稀释血细胞，使得血细
细胞分离：
外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml，平均分至50ml离心管中，931×g，离心8min，吸取上层血浆至50ml离心管中，取1.5ml于EP管中，标记，－80℃保存。用NA稀释血细胞，使得血细胞:NA为1：1，混匀后均匀缓慢地加至相应的A液上层，形成完整的界面。596×g，离心20min。可见明显分层。吸弃第1层上清，小心轻柔地将第2层的白色细胞层分别吸至不同的洁净50ml离心管中。分别向各管中加NA，稀释混匀，定容至40ml/管。931×g，离心8min。吸弃上清，加NA重悬细胞。冻存处理前留取细胞悬液计数和活力测定。MVE液氮罐
细胞冷冻保存
纯化后细胞重悬于含终浓度9.8%的等体积DMSO2ml和右旋糖苷的冷冻保存液中，冷冻保护液配置成2组（1组含80%的无血清培养液，另1组含80%自体血浆）轻轻混匀后置－20℃冰箱冷却平衡5－15min到4℃以下，同时把冻存管放4℃冰箱平衡15min。分装入2ml冻存管内，每管1ml，管壁做好标识。放在样本冻存盒，转移至程序降温盒仪器，最终将细胞保存于－196℃液氮内。MVE液氮罐
外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml，平均分至50ml离心管中，931×g，离心8min，吸取上层血浆至50ml离心管中，取1.5ml于EP管中，标记，－80℃保存。用NA稀释血细胞，使得血细胞:NA为1：1，混匀后均匀缓慢地加至相应的A液上层，形成完整的界面。596×g，离心20min。可见明显分层。吸弃第1层上清，小心轻柔地将第2层的白色细胞层分别吸至不同的洁净50ml离心管中。分别向各管中加NA，稀释混匀，定容至40ml/管。931×g，离心8min。吸弃上清，加NA重悬细胞。冻存处理前留取细胞悬液计数和活力测定。MVE液氮罐
细胞冷冻保存
纯化后细胞重悬于含终浓度9.8%的等体积DMSO2ml和右旋糖苷的冷冻保存液中，冷冻保护液配置成2组（1组含80%的无血清培养液，另1组含80%自体血浆）轻轻混匀后置－20℃冰箱冷却平衡5－15min到4℃以下，同时把冻存管放4℃冰箱平衡15min。分装入2ml冻存管内，每管1ml，管壁做好标识。放在样本冻存盒，转移至程序降温盒仪器，最终将细胞保存于－196℃液氮内。MVE液氮罐
